Scale-Up de Fermentação: Um Guia Abrangente para o Avanço Biotecnológico Global

A fermentação, um processo metabólico que converte açúcares em ácidos, gases ou álcool, é um pilar de várias indústrias, incluindo alimentos e bebidas, farmacêutica, biocombustíveis e enzimas industriais. O aumento de escala dos processos de fermentação, a transição da escala de laboratório para a produção em escala industrial, apresenta desafios significativos e requer um profundo entendimento dos princípios da engenharia de bioprocessos. Este guia fornece uma visão abrangente do scale-up de fermentação, abordando conceitos-chave, desafios, tecnologias e estratégias para a otimização bem-sucedida de bioprocessos em diversas indústrias em todo o mundo.

Por que o Scale-Up de Fermentação é Importante?

A capacidade de aumentar eficazmente a escala dos processos de fermentação é crucial para a comercialização de inovações biotecnológicas. Embora resultados promissores possam ser alcançados em escala de laboratório, a tradução desses resultados para a produção em grande escala requer uma consideração cuidadosa de vários fatores, incluindo:

• Manutenção do Desempenho do Processo: Garantir que o rendimento, a qualidade e a produtividade desejados do produto sejam mantidos à medida que a escala aumenta.
• Custo-Benefício: Otimizar o processo para minimizar os custos de produção e maximizar a rentabilidade.
• Conformidade Regulatória: Atender aos rigorosos requisitos regulatórios para a segurança e eficácia do produto em diferentes mercados globais.
• Atender à Demanda do Mercado: Produzir quantidades suficientes do produto para satisfazer a demanda do mercado.

Navegar com sucesso pelas complexidades do scale-up de fermentação é essencial para empresas que buscam comercializar seus produtos biotecnológicos e obter uma vantagem competitiva no mercado global. Por exemplo, uma empresa farmacêutica que desenvolve um novo antibiótico por meio de fermentação microbiana precisa garantir que o processo de fermentação possa ser escalonado para produzir o medicamento em quantidades suficientes para atender às necessidades dos pacientes em todo o mundo. Da mesma forma, uma empresa de biocombustíveis que visa produzir etanol a partir de biomassa lignocelulósica precisa otimizar o processo de fermentação para a produção em grande escala para tornar os biocombustíveis uma alternativa viável aos combustíveis fósseis.

Princípios-Chave do Scale-Up de Fermentação

O scale-up de fermentação bem-sucedido depende de vários princípios fundamentais da engenharia de bioprocessos. Compreender e aplicar esses princípios é crítico para alcançar o desempenho ideal do processo em escala industrial.

1. Manutenção do Coeficiente Volumétrico de Transferência de Massa Constante (kLa)

A transferência de oxigénio é frequentemente um fator limitante em processos de fermentação aeróbica. O coeficiente volumétrico de transferência de massa (kLa) é um parâmetro crucial que descreve a taxa na qual o oxigénio é transferido da fase gasosa para a fase líquida num biorreator. Manter um kLa constante durante o scale-up é essencial para garantir que as células recebam oxigénio suficiente para o crescimento e a formação do produto. Isso pode ser alcançado ajustando parâmetros como velocidade de agitação, taxa de aeração e geometria do biorreator.

Por exemplo, na produção de ácido cítrico por Aspergillus niger, a limitação de oxigénio pode reduzir significativamente o rendimento de ácido cítrico. Manter um kLa suficiente durante todo o processo de fermentação é crítico para maximizar a produção de ácido cítrico. Diferentes estratégias, como o uso de ar enriquecido com oxigénio ou a otimização do design do impulsor, podem ser empregadas para melhorar a transferência de oxigénio.

2. Manutenção do Tempo de Mistura Constante

A mistura eficiente é crucial para garantir a homogeneidade no biorreator, prevenindo limitações de substrato ou nutrientes e dissipando o calor. Manter um tempo de mistura constante durante o scale-up é importante para garantir que as células experimentem um ambiente uniforme e que gradientes de nutrientes, pH e temperatura sejam minimizados. O tempo de mistura pode ser afetado por fatores como o design do impulsor, a velocidade do impulsor e a geometria do biorreator.

Considere a produção de proteínas recombinantes em cultura de células de mamíferos. As células de mamíferos são sensíveis ao cisalhamento, e a agitação excessiva pode danificar as células e reduzir o rendimento da proteína. No entanto, uma mistura insuficiente pode levar a limitações de nutrientes e aglomeração celular. Otimizar o tempo de mistura para equilibrar esses fatores concorrentes é crucial para um scale-up bem-sucedido.

3. Manutenção da Taxa de Cisalhamento Constante

A taxa de cisalhamento, a taxa na qual camadas adjacentes de fluido se movem umas em relação às outras, pode ter um impacto significativo na viabilidade celular e na qualidade do produto, especialmente para células sensíveis ao cisalhamento, como células de mamíferos e células vegetais. Manter uma taxa de cisalhamento constante durante o scale-up é importante para minimizar os danos às células e garantir a qualidade consistente do produto. A taxa de cisalhamento pode ser controlada ajustando parâmetros como a velocidade e o design do impulsor.

Por exemplo, na produção de anticorpos monoclonais em células CHO, o estresse de cisalhamento excessivo pode levar à lise celular e à libertação de proteases intracelulares, que podem degradar os anticorpos. O uso de impulsores de baixo cisalhamento e a otimização da velocidade de agitação podem ajudar a minimizar o estresse de cisalhamento e melhorar a produção de anticorpos.

4. Manutenção da Potência de Entrada por Unidade de Volume (P/V) Constante

A potência de entrada por unidade de volume (P/V) é uma medida da energia fornecida ao biorreator para mistura e aeração. Manter um P/V constante durante o scale-up pode ajudar a garantir que as características de mistura e transferência de oxigénio do biorreator sejam semelhantes em diferentes escalas. No entanto, é importante notar que o P/V não é o único fator que afeta a mistura e a transferência de oxigénio, e outros parâmetros como o design do impulsor e a geometria do biorreator também devem ser considerados.

Em muitas fermentações bacterianas, um P/V mais alto pode ser aceitável devido à natureza mais robusta das células bacterianas em comparação com as células de mamíferos. No entanto, mesmo em fermentações bacterianas, um P/V excessivo pode levar ao aumento do consumo de energia e, potencialmente, a danos celulares em alguns casos. Portanto, a otimização do P/V em conjunto com outros parâmetros é crucial.

5. Similaridade Geométrica

Manter a similaridade geométrica durante o scale-up significa que as proporções das dimensões do biorreator (por exemplo, diâmetro, altura, diâmetro do impulsor) permanecem constantes. Isso pode ajudar a garantir que os padrões de fluxo e as características de mistura do biorreator sejam semelhantes em diferentes escalas. No entanto, muitas vezes não é possível manter uma similaridade geométrica perfeita devido a restrições práticas, como custo e limitações de espaço. Além disso, a similaridade geométrica perfeita não garante um desempenho idêntico porque a dinâmica dos fluidos não é ditada apenas pela geometria.

Por exemplo, biorreatores geometricamente similares podem ter diferentes proporções de área de superfície para volume, o que pode afetar a transferência de calor e as taxas de evaporação. A modelagem por dinâmica dos fluidos computacional (CFD) pode ser usada para avaliar o impacto dos desvios da similaridade geométrica no desempenho do biorreator.

Desafios no Scale-Up de Fermentação

O aumento de escala dos processos de fermentação apresenta inúmeros desafios, exigindo uma consideração cuidadosa de vários fatores que podem impactar o desempenho do processo.

1. Limitações na Transferência de Oxigénio

À medida que a escala do biorreator aumenta, torna-se mais difícil manter uma transferência de oxigénio suficiente para as células. Isso ocorre porque a proporção de área de superfície para volume diminui e o caminho de difusão para o oxigénio aumenta. A limitação de oxigénio pode levar à redução do crescimento celular, da formação do produto e até à morte celular.

Soluções:

• Aumentar a taxa de aeração.
• Aumentar a velocidade de agitação.
• Usar ar enriquecido com oxigénio ou oxigénio puro.
• Otimizar o design do impulsor.
• Usar um biorreator com uma maior proporção de área de superfície para volume.
• Implementar estratégias como o uso de microbolhas ou aeração por membrana.

2. Remoção de Calor

Os processos de fermentação geram calor devido à atividade metabólica e à agitação. À medida que a escala do biorreator aumenta, torna-se mais difícil remover esse calor, o que pode levar ao aumento da temperatura e à redução do crescimento celular e da formação do produto. Manter a temperatura ideal é crucial para a atividade enzimática e a saúde geral das células.

Soluções:

• Usar um biorreator com uma camisa de refrigeração ou serpentinas de refrigeração internas.
• Aumentar a vazão do líquido de arrefecimento.
• Usar um sistema de refrigeração mais eficiente.
• Otimizar o processo de fermentação para reduzir a geração de calor.
• Considerar o resfriamento evaporativo, se apropriado (e se a perda de produtos voláteis não for uma preocupação).

3. Inomogeneidades na Mistura

À medida que a escala do biorreator aumenta, torna-se mais difícil manter uma mistura uniforme em todo o recipiente. Isso pode levar a gradientes de nutrientes, pH e temperatura, que podem impactar negativamente o crescimento celular e a formação do produto. Zonas mortas ou regiões mal misturadas também podem promover o acúmulo de subprodutos tóxicos.

Soluções:

• Otimizar o design do impulsor.
• Aumentar a velocidade de agitação.
• Usar múltiplos impulsores.
• Otimizar a geometria do biorreator.
• Empregar modelagem CFD para entender e otimizar os padrões de mistura.

4. Controlo de pH

Manter o pH ideal é crucial para o crescimento celular e a formação do produto. À medida que a escala do biorreator aumenta, torna-se mais difícil manter um pH uniforme em todo o recipiente. Isso pode levar a gradientes de pH, que podem impactar negativamente o crescimento celular e a formação do produto. Os subprodutos metabólicos podem alterar significativamente o pH, exigindo um controlo rigoroso.

Soluções:

• Usar um sistema de controlo de pH com adição de ácido e base.
• Otimizar a localização da sonda de pH e dos pontos de adição de ácido/base.
• Usar um tampão para ajudar a manter um pH estável.
• Considerar o uso de um sistema de monitorização e controlo de pH online.

5. Controlo de Espuma

A formação de espuma é um problema comum em processos de fermentação, especialmente aqueles que envolvem proteínas ou surfactantes. A espuma pode levar à redução do volume de trabalho, contaminação e obstrução de sensores e filtros. Também dificulta a transferência de oxigénio.

Soluções:

• Adicionar agentes antiespumantes.
• Otimizar as taxas de agitação e aeração.
• Usar um quebrador de espuma mecânico.
• Considerar o uso de um sensor de espuma para adicionar automaticamente agentes antiespumantes.

6. Alterações na Morfologia ou Fisiologia

As células podem exibir morfologia ou fisiologia alteradas à medida que a escala aumenta. O estresse de cisalhamento ou outras alterações no ambiente do biorreator podem fazer com que as células produzam proteínas diferentes ou tenham taxas de crescimento diferentes. Essas alterações podem impactar o rendimento e a qualidade do produto. Isso é especialmente prevalente em organismos filamentosos ou culturas de células agregadas.

Soluções:

• Monitorizar cuidadosamente a morfologia e a fisiologia celular durante o scale-up.
• Ajustar os parâmetros de fermentação (por exemplo, temperatura, pH, níveis de nutrientes) para manter o crescimento celular e a formação do produto ideais.
• Considerar o uso de um trem de inóculo para adaptar as células gradualmente ao ambiente de maior escala.
• Empregar a Tecnologia Analítica de Processo (PAT) para monitorizar os parâmetros críticos do processo em tempo real.

7. Manutenção da Esterilidade

A manutenção da esterilidade é crucial para prevenir a contaminação e garantir a qualidade do produto. À medida que a escala do biorreator aumenta, torna-se mais difícil manter a esterilidade devido ao aumento da área de superfície e ao maior número de conexões e pontos de amostragem.

Soluções:

• Usar procedimentos de esterilização validados para todos os equipamentos e meios.
• Implementar técnicas assépticas rigorosas durante a operação.
• Usar filtros estéreis para correntes de ar e gás.
• Monitorizar o biorreator para contaminação regularmente.
• Garantir a vedação adequada de todas as conexões e portas.

Tecnologias para o Scale-Up de Fermentação

Várias tecnologias estão disponíveis para auxiliar no scale-up e na otimização da fermentação. Essas tecnologias podem ajudar a superar os desafios associados ao aumento de escala dos processos de fermentação e a melhorar o desempenho do processo.

1. Dinâmica dos Fluidos Computacional (CFD)

A CFD é uma ferramenta poderosa para simular o fluxo de fluidos, a transferência de calor e a transferência de massa em biorreatores. A CFD pode ser usada para otimizar o design do biorreator, prever padrões de mistura e identificar zonas mortas. A modelagem CFD pode ajudar a prever as condições em escalas maiores com base em experimentos de pequena escala, reduzindo o número de dispendiosos ensaios em escala piloto necessários.

Exemplo: A CFD pode ser usada para otimizar o design e o posicionamento do impulsor em um biorreator de grande escala para garantir uma mistura uniforme e transferência de oxigénio. Também pode identificar áreas onde o estresse de cisalhamento é alto, permitindo que os engenheiros ajustem o design para minimizar os danos às células.

2. Tecnologia Analítica de Processo (PAT)

A PAT é um sistema para projetar, analisar e controlar a fabricação por meio de medições oportunas (ou seja, durante o processamento) de atributos críticos de qualidade e atributos de desempenho de matérias-primas e em processo, com o objetivo de garantir a qualidade do produto final. As ferramentas PAT incluem sensores para monitorizar pH, temperatura, oxigénio dissolvido, densidade celular e níveis de nutrientes. A aquisição de dados em tempo real permite ajustes imediatos ao processo de fermentação, levando a uma maior eficiência e reprodutibilidade.

Exemplo: O uso de um espectrómetro de infravermelho próximo (NIR) online para monitorizar os níveis de glicose no caldo de fermentação permite ajustes em tempo real na taxa de alimentação, prevenindo a limitação ou o excesso de glicose, que podem impactar negativamente o rendimento do produto.

3. Delineamento Estatístico de Experimentos (DoE)

O DoE é uma abordagem sistemática para planear e conduzir experimentos para identificar as condições operacionais ótimas para um processo. O DoE pode ser usado para otimizar parâmetros de fermentação como temperatura, pH, níveis de nutrientes e taxa de aeração. O DoE é uma abordagem muito mais eficiente do que a experimentação tradicional de "um fator de cada vez".

Exemplo: O uso de DoE para otimizar as concentrações de diferentes nutrientes no meio de fermentação pode melhorar significativamente o rendimento do produto. A abordagem estatística permite a identificação de interações entre nutrientes que podem não ser aparentes através da experimentação tradicional.

4. Designs Avançados de Biorreatores

Vários designs avançados de biorreatores foram desenvolvidos para melhorar o desempenho do processo. Estes incluem:

• Biorreatores airlift: Estes biorreatores usam ar para fornecer mistura e transferência de oxigénio. São particularmente úteis para células sensíveis ao cisalhamento.
• Biorreatores de membrana: Estes biorreatores usam membranas para separar as células do caldo de fermentação, permitindo altas densidades celulares e remoção contínua do produto.
• Biorreatores de onda (wave): Estes biorreatores usam um movimento de balanço para fornecer mistura e aeração. São particularmente úteis para aplicações de cultura de células.
• Biorreatores de uso único: Estes biorreatores são pré-esterilizados e descartáveis, eliminando a necessidade de limpeza e esterilização e reduzindo o risco de contaminação.

Exemplo: Os biorreatores de uso único estão sendo cada vez mais utilizados na indústria biofarmacêutica para a produção de anticorpos monoclonais. Esses biorreatores oferecem várias vantagens, incluindo menor investimento de capital, tempos de resposta mais rápidos e menor risco de contaminação.

5. Modelos de Scale-Down

Modelos de scale-down são biorreatores de pequena escala projetados para imitar as condições em um biorreator de grande escala. Os modelos de scale-down podem ser usados para estudar o impacto de diferentes parâmetros do processo no crescimento celular e na formação do produto, sem a necessidade de realizar experimentos no biorreator de grande escala. Isso economiza tempo e recursos.

Exemplo: Um modelo de scale-down pode ser usado para simular as limitações de transferência de oxigénio em um biorreator de grande escala. Ao estudar o impacto da limitação de oxigénio no crescimento celular e na formação do produto no modelo de scale-down, os engenheiros podem desenvolver estratégias para superar essas limitações no biorreator de grande escala.

Estratégias para um Scale-Up de Fermentação Bem-Sucedido

Um scale-up de fermentação bem-sucedido requer uma estratégia bem planeada e executada que aborde os desafios e aproveite as tecnologias disponíveis.

1. Compreensão Completa do Processo

Um profundo entendimento do processo de fermentação é essencial para um scale-up bem-sucedido. Isso inclui a compreensão das vias metabólicas envolvidas, as condições ótimas de crescimento para as células e os parâmetros críticos do processo que afetam o rendimento e a qualidade do produto. A compreensão de potenciais fatores inibitórios também é crítica. Uma base sólida construída sobre experimentos de pequena escala bem caracterizados é essencial.

2. Desenvolver um Trem de Inóculo Robusto

Um trem de inóculo robusto é crucial para garantir que as células estejam saudáveis e crescendo ativamente quando são transferidas para o biorreator de grande escala. O trem de inóculo deve ser projetado para adaptar gradualmente as células ao ambiente de maior escala. Isso geralmente envolve começar com um pequeno inóculo em um frasco de agitação e aumentar gradualmente o volume do inóculo através de uma série de biorreatores progressivamente maiores.

3. Implementar uma Abordagem Apropriada à Fase

Uma abordagem apropriada à fase significa que o nível de rigor e documentação deve ser compatível com o estágio de desenvolvimento. O desenvolvimento do processo em estágio inicial pode focar na identificação dos parâmetros ótimos de fermentação, enquanto o desenvolvimento do processo em estágio posterior deve focar na otimização e validação do processo para garantir a qualidade consistente e a reprodutibilidade do produto.

4. Realizar Estudos em Escala Piloto

Estudos em escala piloto são um passo essencial no processo de scale-up. Os estudos em escala piloto permitem testar o processo de fermentação em um biorreator que é mais próximo em tamanho do biorreator de grande escala. Isso permite identificar problemas potenciais e otimizar o processo antes de passar para a produção em escala real. Os estudos em escala piloto podem revelar problemas com mistura, transferência de calor ou controlo de pH que não eram aparentes na escala menor.

5. Monitorizar Parâmetros Críticos do Processo

A monitorização contínua dos parâmetros críticos do processo (CPPs) é essencial para garantir a qualidade consistente e a reprodutibilidade do produto. Os CPPs incluem temperatura, pH, oxigénio dissolvido, densidade celular e níveis de nutrientes. A monitorização em tempo real permite ajustes imediatos ao processo de fermentação, prevenindo desvios das condições operacionais ótimas.

6. Implementar Estratégias de Controlo de Processo

As estratégias de controlo de processo são essenciais para manter o processo de fermentação dentro da faixa operacional desejada. Isso inclui a implementação de malhas de controlo de feedback para ajustar automaticamente parâmetros como temperatura, pH e oxigénio dissolvido. Estratégias de controlo avançadas, como o controlo preditivo por modelo (MPC), podem ser usadas para otimizar o processo de fermentação em tempo real.

7. Desenvolver um Protocolo Completo de Limpeza e Esterilização

Um protocolo completo de limpeza e esterilização é essencial para prevenir a contaminação e garantir a qualidade do produto. O protocolo deve incluir procedimentos detalhados para a limpeza e esterilização de todos os equipamentos e meios. A eficácia do protocolo de limpeza e esterilização deve ser validada para garantir que ele é capaz de remover todos os contaminantes.

8. Documentação e Rastreabilidade

A documentação detalhada é crucial para demonstrar que o processo de fermentação é bem controlado e que o produto atende a todos os requisitos de qualidade. Isso inclui a documentação de todos os parâmetros do processo, matérias-primas e resultados analíticos. Uma trilha de auditoria abrangente deve ser mantida para garantir a rastreabilidade de todos os dados.

Estudos de Caso Globais em Scale-Up de Fermentação

Examinar histórias de sucesso de scale-up de fermentação de todo o mundo oferece insights valiosos e lições aprendidas.

1. Produção de Insulina na Dinamarca

A Novo Nordisk, uma empresa farmacêutica dinamarquesa, é líder global na produção de insulina. A empresa escalonou com sucesso seus processos de fermentação para a produção de insulina recombinante em Saccharomyces cerevisiae. A chave para o seu sucesso foi a implementação de estratégias avançadas de controlo de processo e o uso de biorreatores de uso único. Eles também empregam técnicas avançadas de processamento downstream para purificar a insulina e atender aos rigorosos requisitos regulatórios em todo o mundo.

2. Produção de Biocombustíveis no Brasil

O Brasil é líder mundial na produção de etanol a partir da cana-de-açúcar. As empresas brasileiras desenvolveram processos de fermentação altamente eficientes para a produção de etanol, que é usado como biocombustível. O scale-up desses processos envolveu a otimização das cepas de levedura usadas para a fermentação, a melhoria da eficiência do processo de fermentação e o desenvolvimento de técnicas robustas de processamento downstream. A fermentação contínua é comumente empregada.

3. Produção de Antibióticos na Índia

A Índia é um grande produtor de antibióticos. As empresas farmacêuticas indianas escalonaram com sucesso seus processos de fermentação para a produção de vários antibióticos, incluindo penicilina e cefalosporinas. Isso envolveu a otimização das condições de fermentação, a melhoria da eficiência do processo de fermentação e o desenvolvimento de técnicas robustas de processamento downstream. Eles também se concentraram em estratégias de produção de baixo custo para competir no mercado global.

4. Produção de Enzimas Industriais na China

A China é um produtor significativo de enzimas industriais. As empresas chinesas escalonaram seus processos de fermentação para a produção de várias enzimas, incluindo amilases, proteases e lipases. Essas enzimas são usadas em uma ampla gama de indústrias, incluindo alimentos e bebidas, têxteis e detergentes. A fermentação eficiente em grande escala usando organismos geneticamente modificados (OGMs) é uma prática comum. Os desafios incluem lidar com a diversidade de matérias-primas e manter o controlo de qualidade.

O Futuro do Scale-Up de Fermentação

O campo do scale-up de fermentação está em constante evolução, com novas tecnologias e estratégias sendo desenvolvidas para melhorar o desempenho do processo e reduzir custos. Algumas das principais tendências no scale-up de fermentação incluem:

• Aumento do uso de automação e robótica: A automação e a robótica podem ajudar a melhorar a eficiência e a reprodutibilidade dos processos de fermentação.
• Desenvolvimento de designs de biorreatores mais eficientes: Novos designs de biorreatores estão sendo desenvolvidos para melhorar a mistura, a transferência de oxigénio e a transferência de calor.
• Aumento do uso da tecnologia analítica de processo (PAT): A PAT pode ajudar a monitorizar os parâmetros críticos do processo em tempo real, permitindo ajustes imediatos ao processo de fermentação.
• Integração de análise de dados e inteligência artificial (IA): A análise de dados e a IA podem ser usadas para otimizar os processos de fermentação e prever o desempenho do processo.
• Ênfase na sustentabilidade: As empresas estão cada vez mais focadas no desenvolvimento de processos de fermentação sustentáveis que minimizem o desperdício e o consumo de energia.

Conclusão

O scale-up de fermentação é um processo complexo e desafiador, mas é essencial para a comercialização de inovações biotecnológicas. Ao compreender os princípios-chave do scale-up de fermentação, abordar os desafios, aproveitar as tecnologias disponíveis e implementar uma estratégia bem planeada, as empresas podem escalar com sucesso seus processos de fermentação e obter uma vantagem competitiva no mercado global. A inovação contínua e o foco na sustentabilidade serão cruciais para o futuro da tecnologia de fermentação em todo o mundo.